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摘要:德國耶拿,采用紫外分光光譜儀SPECORD? 200 PLUS和帕爾貼控溫裝置相配合,具有控溫精度高,升溫無延遲等優(yōu)點,根據(jù)DNA測定應用要求,在不同的計量模式下,可以隨意編程溫度程序。
DNA加熱到一定溫度時,DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)就會發(fā)生裂解,DNA堿基互補的主要作用力氫鍵結(jié)構(gòu)就會被破壞,這種變性過程稱為DNA熔解,通常將DNA變性,即增色效應達到一半時的溫度,稱為DNA解鏈溫度,也稱為熔解溫度或者叫做DNA熔點(Tm)。和的DNA熔解測定,是紫外可見吸收光譜法,在紫外光譜法中表現(xiàn)為吸光度的增加(增色效應)。吸收強度與溫度關(guān)系曲線的拐點即確定的熔點。
德國耶拿分析儀器股份公司,采用紫外分光光譜儀SPECORD® 200 PLUS和帕爾貼控溫裝置相配合,具有控溫精度高,升溫無延遲等優(yōu)點,根據(jù)DNA測定應用要求,在不同的計量模式下,可以隨意編程溫度程序。
利用超微量比色皿,對質(zhì)粒DNA水溶液和小牛胸腺兩種樣本的DNA熔點進行了測定,樣品光譜在220nm和300nm處有吸收峰。分別采用了‘同步’測量模式和‘循環(huán)’測量模式。
結(jié)果表明,在DNA樣本熔化過程可以很好地顯示在兩個測量模式中。小牛胸腺DNA的吸光度的增加比天然DNA發(fā)生溫度低。天然DNA通常在85°C以上高溫下經(jīng)常融化,小牛胸腺DNA熔點高于此溫度。此外,堿基對比例越高,熔點也會降低。